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维生素C检测试剂盒(菲咯啉比色法)主要用于植物组织中的维生素C(抗坏血酸)的含量检测。

在酸性条件下，维生素C把三价铁离子还原成亚铁离子，后者与菲咯啉形成稳定的红色螯合物，以分光光度计534nm处检测吸光度，在一定浓度范围(样品浓度控制在0.5～35μg/mL)吸光度与维生素C含量呈线性关系，获得Vitamin C含量。

• 反应稳定，不易褪色；
  
• 操作简便；
  
• 还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，因此专一性好；
  
• 灵敏度高。

• 蒸馏水、无水乙醇
  
• 研钵或匀浆器、离心机、离心管或试管
  
• 比色杯、分光光度计、恒温箱或水浴锅

• 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 组织匀浆液有腐蚀性，应小心操作，避免直接接触。
  
• 加样后反应不完全，因此不能立即测定，一般情况下60min内即可充分反应，应当在60～120min内测定完成。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 稀释组织匀浆液：按5×组织匀浆液∶蒸馏水＝1∶4的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
  
• 准备样品：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量2～3g，加入研磨器内，再加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50mL离心管，补充1×组织匀浆液至22mL，充分混匀，4000g离心5min，上清液即为待测液。
  
• 配制系列Vitamin C标准：将25mg Vitamin C标准用1mL 1×组织匀浆液溶解即得Vitamin C标准(25mg/mL)，再用1×组织匀浆液稀释成Vitamin C标准(50μg/mL)，取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。配制好的Vitamin C标准(25mg/mL)放置-20℃，短期保存。
  

  加入物(μL)	1	2	3	4	5	6
  Vitamin C标准(50μg/mL)	40	100	160	200	400	600
  1×组织匀浆液	960	900	840	800	600	400
  相当于Vitamin C含量(μg)	2	5	8	10	20	30

• 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的Vitamin C含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
  

  加入物(mL)	空白管	标准管	测定管
  1×组织匀浆液	1.0	－	－
  系列Vitamin C标准(1～6号)	－	1.0	－
  待测液	－	－	1.0
  无水乙醇	0.5	0.5	0.5
  混匀
  酸性缓冲液	0.25	0.25	0.25
  菲咯啉显色液	0.5	0.5	0.5
  Vitamin C Assay Buffer	0.25	0.25	0.25

• Vitamin C测定：混匀，30℃温箱中反应60min，以空白管调零，比色杯光径1cm，分光光度计测定534nm系列标准管、测定管的吸光度。